R ecovery

1. Scoateți tubul înghețat din azotul lichid și imediat într-o baie de apă la 37℃, agitând ușor. După ce lichidul se topește (aproximativ 1-1,5 minute), scoateți puțin alcool și puneți-l pe masa de lucru ultra-curată.

2. Luați suspensia de celule într-un tub de centrifugă de 15 ml cu mediu de 10 ml (spălați tubul înghețat cu mediu și spălați toate celulele lipite de perete) și centrifugeți la 1000 timp de 5 minute.

3. Supernatantul a fost inversat şi s-a adăugat 1 ml de mediu pentru a suspenda celulele. Afumați într-un vas de 10 cm cu 10 ml de mediu și agitați ușor la stânga și la dreapta pentru a distribui uniform celulele în vas.

4. Marcați tipul și data celulei, numele uman și așa mai departe, puneți-o în incubatorul cu CO2, lipiți celulele și schimbați mediul.

5. Mediul a fost schimbat o dată la 3 zile.

P masaj

1. Plantele au fost trecute pentru a ajunge la o acoperire de 80-90%.

2. Abup mediul original .

3. Adăugați tripsina corespunzătoare (acoperiți doar celulele) și digerați timp de 1-2 minute .

4. Digestia a fost terminată prin adăugarea unui volum egal de mediu care conţine ser .

5. Suflați celulele cu un pistol cu ​​pipetă și lăsați-le pe toate suspendate.

6. Celulele au fost aspirate într-un tub de centrifugă de 15 ml și centrifugate la 1000 timp de 5 minute.

7. Se toarnă supernatantul și se adaugă 1-2 ml de mediu pentru a arunca toate celulele în aer.

8. Celulele au fost trecute în mai multe vase de cultură în funcție de specia de celule. În general, celulele canceroase sunt împărțite în 5 celule și sunt transmise trei celule normale. Continuați să cultivați.

Liber pentru a digera celulele și a le centrifuga (ibid. mai sus).

Suspendați celulele cu soluția de depozitare congelată potrivită, împărțiți-le într-un tub congelator sterilizat, odihniți-vă câteva minute și specificați tipul celulei și data de depozitare congelată. 4℃ 30min, -20℃ 30min, -80℃ peste noapte și apoi depozitat în perfuzie de azot lichid.

Prepararea soluției de crioconservare: 70% mediu 20% FBS 10% DMSO. DMSO trebuie adăugat încet și agitat constant.