Ca material auxiliar în experimentele de detectare ELISA, o enzimă farfurie joacă un rol decisiv și afectează direct rezultatele experimentale finale. Calitatea Placa de enzime depinde în principal de sensibilitatea sa la adsorbția proteinelor, diferența de capacitate de adsorbție a proteinelor dintre plăci și găuri și diferența dintre loturile de produse achiziționate. placă de enzime . Prin urmare, selectarea unui placă de enzime produs cu sensibilitate ridicată la adsorbția proteinelor, diferența mică dintre găurile capacității de adsorbție a proteinelor și o diferență mică între loturi este garanția pentru experimentator de a obține rezultate experimentale fiabile și stabile.

Placa de enzime clasificare: conform diferitelor standarde de clasificare, farfuria are clasificări diferite.

1: În funcție de numărul de găuri, acesta poate fi împărțit în 96 de găuri, 48 de găuri etc. Deoarece placă de enzime este utilizat în principal cu cititorul de microplăci, cel farfurie metrul de pe piață are cel mult 96 de găuri, deci microplaca are 96 de găuri.

2: În funcție de diferitele funduri, este împărțit în fund plat, fund U, fund V etc.

Indicele de refracție al bazei plate este scăzut, ceea ce este potrivit pentru detectarea în microplacă;

T Indicele de refracție al microplăcii U este ridicat, convenabil pentru eșantionare, prelevare și amestecare și poate observa direct schimbarea culorii fără a o plasa pe microplacă, pentru a determina dacă există o reacție imună corespunzătoare.

Microplaca bazei V poate absorbi cu precizie proba.

3: În funcție de diferitele abilități de legare ale microplăcii și proteinelor și a altor molecule, aceasta este împărțită în forță de legare mare, forță de legare medie și aminare.

(1) Forță mare de legare

După suprafața acestei microplăci, capacitatea sa de legare la proteine ​​este mult îmbunătățită, până la 300 ~ 400ng IgG / cm2, iar greutatea moleculară a proteinei principale legate este > 10 kD. Utilizarea acestei clase de microplăci poate îmbunătăți sensibilitatea și poate reduce relativ concentrația și cantitatea de proteine ​​acoperite, ceea ce este mai ușor de produs reacții nespecifice. După acoperirea cu antigen sau anticorp, detergentul neionic nu poate etanșa în mod eficient locul proteinei nelegate, iar proteina trebuie utilizată ca agent de etanșare.

(2) Forță de legare medie

Astfel de plăci de microplăci se leagă pasiv la proteină prin legături hidrofobe de la suprafață și sunt potrivite ca purtători în fază solidă pentru proteine ​​macromoleculare cu greutate moleculară > 20 kD, cu o capacitate de legare la proteine ​​de 200 până la 300 ng IgG / cm2. Datorită caracteristicilor singurei legături la macromolecule, este potrivit pentru purtătorii în fază solidă ca anticorpi sau antigeni nepurificați pentru a reduce potențialul de reactivitate încrucișată nespecifică. Placa poate fi o proteină inertă sau un detergent neionic ca soluție de etanșare.

(3) Aminare

Această microplacă după o modificare a suprafeței are o grupare amino încărcată pozitiv, a cărei legătură hidrofobă este înlocuită cu o legătură hidrofilă. Această clasă de microplăci este potrivită ca purtător în fază solidă pentru proteine ​​cu molecule mici. Folosind un tampon adecvat și pH, suprafața se leagă de molecule mici încărcate negativ prin legături ionice. Datorită proprietăților hidrofile ale suprafeței sale și capacității sale de a fi legat covalent de alți agenti de reticulare, poate fi utilizat pentru fixarea moleculelor de proteine ​​solubile în agenți de decontaminare precum Triton-100, Tween 20 etc. Defectul acestei plăci este din cauza hidrofobicității reduse; în plus, suprafața trebuie închisă eficient. Datorită proprietăților de suprafață hidrofile și covalente, soluția de etanșare utilizată trebuie să poată interacționa cu orice grupare funcțională din gruparea amino nereactivă și agentul de reticulare selectat.

4. În funcție de culoare, poate fi împărțit în transparent, negru și alb.

Transparentul este cel mai frecvent utilizat pentru cele mai generale experimente de imunizare legată de enzime. În Relcontrast la microplaca transparentă, există și microplăci opace pentru detectarea luminoasă, în general alb-negru. Microplaca neagră în sine are absorbție a luminii, astfel încât semnalul său este mult mai scăzut decât microplaca albă, deci este utilizată în general pentru a detecta lumina puternică, cum ar fi detectarea fluorescenței. Microplaca albă este folosită pentru detectarea luminii slabe, adesea folosită pentru chemiluminiscența generală. În plus, microplaca neagră poate slăbi și problema reacțiilor nespecifice. În același timp, este important de reținut că cu microplaca generală nu poate fi detectarea luminoasă, deoarece lumina emisă de reacția de chemiluminiscență este izotropă, dacă, cu o microplacă transparentă, lumina nu se va răspândi numai din direcția verticală, dar, de asemenea, din direcția orizontală, face lumina cu ușurință prin spațiul dintre gaura și peretele găurii, rezultând în lumina valorii de absorbție a luminii a găurii este afectată de lumina emisă de orificiul adiacent.

O microplacă bună ar trebui să aibă o performanță bună de adsorbție, o valoare goală scăzută, o transparență ridicată a fundului găurii și o performanță similară între plăci și între găurile aceleiași plăci. Datorită diferenței de materii prime și a diferenței în procesul de producție, calitatea diferitelor produse este foarte diferită, prin urmare, performanța fiecărui lot de microplăci trebuie verificată în prealabil înainte de utilizare. Metodele de inspecție utilizate în mod obișnuit sunt o anumită concentrație de IgG umană (în general 10 ng/ml) acoperită cu godeuri ale plăcii ELISA, după spălare, adăugarea unei diluții adecvate de anticorp anti-IgG uman marcat cu enzimă la fiecare godeu, spălare după conservarea căldurii, adăugând culoarea substratului, opriți reacția enzimatică și măsurați absorbanța soluției în fiecare godeu. Condițiile de reacție au fost controlate astfel încât citirea fiecărui godeu a fost menținută la o absorbanță de aproximativ 0,8. S-a calculat media citirilor totale. Diferența dintre media tuturor citirilor individuale și a tuturor citirilor trebuie să fie mai mică de 10%. Următoarele trei microplăci sunt A, B și C ca exemplu.

Metodă directă: pentru a detecta adsorbția IgG umană pe suprafața microplăcii

Metoda sandwich cu anticorp dublu: antigen în ser pozitiv pentru anticorp anti-uman

După cum se poate observa din figura de mai sus, în aceste trei tipuri de plăci de bioenzime, microplaca de clasa A are un efect de adsorbție a proteinelor mai bun, dar îmbunătățește și sensibilitatea adsorbției proteinelor, ceea ce poate oferi date experimentale mai fiabile. În plus, puteți întreba despre placa diferenței de lot. Următoarea este diferența de lot a unei anumite plăci. După cum se poate vedea din diagrama de date privind diferențele în interiorul lotului, microplaca are o bună stabilitate între loturi, iar diferența de coeficient de variație în interiorul lotului (CV) este de aproximativ 5,0%, ceea ce este semnificativ mai mic decât coeficientul de variație în interiorul lotului sub 10,0% în standardul de control al calității pentru reacția imună clinică. Prin urmare, este potrivit și pentru experimentele ELISA.